Thái J. thú. Med.2010. 40 (3): 337-341.

Phát hiện Hepatopancreatitis hoại tử (NHP)

tôm hoang dã từ Laguna Madre, Mexico

Phản ứng Multiplex Polymerase Chain

Gabriel Aguirre-Guzman * Chúa Giêsu Genaro Sanchez-Martinez Roberto Pérez-Castaneda

Rafael Orta-Rodriguez

Tóm tắt

Madre Laguna ở Mexico là một vườn ươm, tăng trưởng, và khu vực trú ẩn cho tôm và các loài động vật hoang dã khác.

Những sinh vật này hỗ trợ một nghề cá quan trọng đối với ngành công nghiệp địa phương (thứ ba diễn ra tại Mexico), mà có thể bị bệnh

rất ít nghiên cứu. Tôm hoang dã được thu thập ngẫu nhiên từ hai trạm lấy mẫu (Carrizal và Carbonera)

mỗi tháng một lần trong một năm (tháng 9 năm 2007 đến tháng 9 năm 2008) để màn hình cho virus và vi khuẩn. Tôm

taxonomically xác định, tổ chức tại hồ bơi của ba sinh vật mỗi loài và phân tích sự hiện diện của WSSV,

IHHNV, NHP và HPV thương mại multiplex PCR kit (DiagXotics Inc USA). Tất cả các tôm loài hoang dã

(Litopenaeus setiferus, Farfantepenaeus aztecus, và F. duorarum) đã được tiêu cực đối với sự hiện diện của virus. Tuy nhiên,

hồ bơi khác nhau của F. duorarum (tỷ lệ 15 và tăng 5,6%) và F. aztecus (tỷ lệ 17 và 5%) dương tính với

NHP trong cả hai trạm (Carrizal và Carbonera). Làm việc này là báo cáo xác nhận đầu tiên về sự hiện diện của

vi khuẩn trên tôm hoang dã, trong đó đặt ra một mối đe dọa tiềm năng cho ngành thủy sản địa phương và hoạt động nuôi trồng thủy sản trong

Laguna Madre và Vịnh Mexico.

Từ khóa: NHP, PCR, Wild tôm

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia (FMVZ). Đại học Autónoma de Tamaulipas (UAT). Cd. Victoria, Tamps.

87000 Mexico

Tương ứng với tác giả E-mail: [email protected]

Ngắn Truyền thông 338 Aguirre-Guzman G. et al. / Thái J. thú. Med. Năm 2010. 40 (3): 337-341.

กั่Giới thiệu

   Sản xuất thủy sản thế giới đã hơi

giảm trong khi tiêu thụ của con người đã tăng lên

(Bartley et al, 2006). Điều này giảm trong nắm bắt

thủy sản đã được bù đắp bằng một phần nhanh chóng

tăng trưởng của ngành công nghiệp, nuôi trồng thuỷ sản nơi

thương mại văn hóa của tôm penaeid là một quan trọng

khu vực (Aguirre-Guzman et al., 2009). Nuôi tôm

điều kiện tạo thuận lợi cho sự hiện diện của tác nhân gây bệnh, tăng trưởng, và

phổ biến cho môi trường, nước láng giềng

các trang trại khu vực, và chịu trách nhiệm cho sự sụp đổ của

ngành công nghiệp tôm ở một số khu vực trên thế giới

(Flegel, 2006; Aguirre-Guzman et al, 2009; Cock et al,.

2009).

  Việc vận chuyển trên toàn thế giới của tôm nuôi

đến các khu vực nền văn hóa mới đã tăng lên, nơi mà một số

Các sinh vật như tôm thẻ chân trắng Litopenaeus, L. stylirostris,

Penaeus monodon là loài ngoại lai có thể thực hiện

tác nhân gây bệnh bất thường, trình bày một nguy cơ cho địa phương

động vật (Bartley et al, 2006; Río-Rodríguez et al, 2006.

Freitas et al, 2007). Hơn nữa, tôm chế biến

thực vật, sản phẩm phụ của họ và giúp nước thải trong

lây lan của mầm bệnh (Gill, 2000) và mới nổi

bệnh truyền nhiễm (Bartley et al, 2006, Wang và cộng sự,.

2006). Tuy nhiên, kiến ​​thức về tác động của

thành lập hoặc ngoài nước, sinh vật và các mầm bệnh của họ

các quần thể tôm hoang dã, và tác động của họ về địa phương

thủy sản là hạn chế (Río-Rodríguez et al., 2006).

  Madre Laguna là một đầm phá rộng lớn

hệ thống ở bờ biển phía tây của Vịnh Mexico,

đó là một nơi ẩn náu, nhà trẻ và khu vực tăng trưởng cho cá,

chim, rùa biển, tôm và các sinh vật khác với

thương mại có ý nghĩa. Nó dài 200 km (200.000 ha

nước nông) và hỗ trợ ngành thủy sản quan trọng

L. setiferus, Farfantepenaeus duorarum, và F. aztecus.

Loài này cuối cùng là tôm chủ yếu được thu thập bởi

thủ công và thương mại thủy sản theo đến Vịnh

Mexico, cũng như các loài chính được sử dụng trong lồng

văn hóa nghiên cứu trong Madre Laguna (Britton và

Río Morton năm 1989; Fernandez-Martinez et al, 2004;

Rodríguez et al, 2006).

  Tác nhân gây bệnh khác nhau đã được phát hiện trong tất cả các

giai đoạn phát triển của tôm nuôi và hoang dã,

từ ấu trùng cho người lớn (Flegel, 2006). Tuy nhiên, trong

Vịnh Mexico các đại lý chịu trách nhiệm về

hoại tử hepatopancreatitis (NHP) chỉ có được

phát hiện trên tôm thẻ chân trắng nuôi L., mặc dù sự hiện diện của nó

đã được đề xuất trên các sinh vật hoang dã (Río

Rodríguez et al, 2006). Các dấu hiệu của bệnh bao gồm

tỷ lệ tử vong, hôn mê, kém ăn và tăng trưởng chậm,

chán ăn, rỗng ruột, làm mềm bộ xương ngoài

và trạng thái bình thường cơ quan (Lightner, 1996). Mục đích của

nghiên cứu này là màn hình tôm tự nhiên từ Laguna

Madre sự hiện diện của WSSV, IHHNV, NHP, và

HPV bằng cách sử dụng PCR là một giao thức phát hiện. Aguirre-Guzman G. et al. / Thái J. thú. Med. Năm 2010. 40 (3): 337-341. 339

Vật liệu và phương pháp

Mẫu khu vực và bộ sưu tập: tôm được thu thập

từ hai trạm [Carbonera (24 ° 37'N-98 ° 45'W) và

Carrizal (24 ° 55'N-98 ° 27'W)] trong Laguna Madre

(Hình 1), thủy sản giáp xác này là bị mắc kẹt trong

một castnet giống như thiết bị tận thu (charangas) (hình 2).

Hai mẫu tôm vị thành niên hai mươi mỗi trạm

đã thu thập ngẫu nhiên vào ban đêm mỗi tháng một lần từ

Tháng 9 năm 2007 đến tháng 9 năm 2008, [20 tôm x 2

mẫu = 40 tôm cho mỗi trạm trạm 2 x = 80

tôm một đêm x 12 tháng = 960 tổng số tôm mỗi

năm. Không có lấy mẫu vào tháng Sáu do

đóng cửa mùa trong nghề đánh bắt tôm. Tất cả các mẫu

tôm hoang dã đã được lưu trữ trong các thùng chứa vô trùng

70% ethanol (Vincent và Lotz, 2007) và vận chuyển

trong một hộp polystyrene Sinh học phân tử của chúng tôi

Phòng thí nghiệm (FMVZ, UAT). Tôm

taxonomically xác định và quan sát các dấu hiệu của

bệnh (Lightner, 1996).

Hình 1: Vị trí của các trang web lấy mẫu dọc theo Laguna

Madre Tamaulipas (Mexico).

Hình 2 Charanga, một thiết bị tận thu được sử dụng trong Laguna

Madre, Tamaulipas cho ngành đánh bắt cá tôm.

Polymerase Chain Reaction (PCR) phát hiện:

xác định tôm, từ mỗi tháng và lấy mẫu

nhà ga, được gộp lại trong các nhóm của ba sinh vật mỗi

loài và phân tích độc lập cho PCR. Mỗi

tôm trong hồ bơi đã được mổ xẻ và pleopods và

gan tụy lấy mẫu, trộn lẫn và xử lý

DNA chiết xuất bằng cách sử dụng một bộ DNA cô lập thương mại

(Hướng dẫn SV bộ gen DNA sạch hệ thống,

Promega, Mỹ). DNA chiết xuất đã được trình chiếu

phát hiện sự hiện diện của vi sinh vật bằng cách sử dụng

multiplex mồi kit WSSV, IHHNV, NHP, và

HPV (DiagXotics, USA) (Ibarra-Gámez et al., 2007).

PCR được thực hiện trong tổng khối lượng là 25 ml

(12,5 ml của Go Taq 2x, 6,5 ml nước), 5 ml của ADN,

và 1 ml hỗn hợp mồi multiplex WSSV, IHHNV,

NHP-HPV. Giao thức đi xe đạp bao gồm một ban đầu

2 phút biến tính ở 95 ° C, tiếp theo là 40 chu kỳ

biến tính (30 giây ở mức 94 ° C), ủ (30 giây

55 ° C), và phần mở rộng (90 giây ở 72 ° C) với một trận chung kết

mở rộng ở 72 ° C trong 7 phút. Mồi multiplex

(DiagXotics, Mỹ) bộ dụng cụ sản xuất amplicon 401, 347,

312, và 255 bp (WSSV, IHHNV, NHP, và HPV

tương ứng). Nó cũng có một DNA tôm nội bộ

kiểm soát của 506 bp, được phát hiện trong các tiêu cực

Kiểm soát (SPF tôm DNA) và mô tất cả tôm

mẫu. Ba microlitres của sản phẩm khuếch đại

được phân tích bằng điện di (100V tại 90-120 phút)

trên gel agarose 1%. Gel được hình dung bằng cách sử dụng một

DIGI DOC-IT hệ thống. Gần đây, giao thức PCR

đã được sử dụng, với kết quả tích cực, trong một intercalibration

thực hiện các phòng thí nghiệm Mexico liên quan đến tôm

chẩn đoán. Intercalibration này được thực hiện bởi

chính phủ Mexico với trường Đại học

Arizona (Nuôi trồng thủy sản Bệnh học Phòng thí nghiệm, USA).

 340 Aguirre-Guzman G. et al. / Thái J. thú. Med. Năm 2010. 40 (3): 337-341.

Kết quả và thảo luận

  Các mẫu tôm được taxonomically

xác định là F. aztecus, F. duorarum và L. setiferus

(474, 318, 24 org; 816 tổng số tôm, 144

không xác định), tất cả các loài thương mại

tầm quan trọng (Britton và Morton, 1989), và

cho thấy không có dấu hiệu của bệnh. Kết quả cho thấy rằng tất cả các

hồ tôm hoang dã đều âm tính với WSSV, IHHNV

và HPV. Sự phổ biến của NHP trong F. duorarum

hồ là 15 và 5,6% và F. aztecus là 17 và 5%

Carrizal và Carbonera, tương ứng. Hình 3

cho thấy một gel agarose với các đặc tính tích cực

NHP amplicon (312 bp) phát hiện bằng PCR multiplex.

506 bp kiểm soát nội bộ cũng có thể được quan sát thấy trong

tiêu cực kiểm soát (lane 3) và trong các mẫu tôm tự nhiên

(Làn đường 5, 6, 7). PCR dương tính Trạng thái đã được khẳng định

với IQ2000 kit (Briggs et al, 2004) cho NHP

theo hướng dẫn sản xuất (dữ liệu không hiển thị).

Hình 3 agarose (1%) gel điện di

amplicon tích cực cho NHP từ hoang dã

tôm lấy mẫu từ Madre Laguna,

Tamaulipas sử dụng một bộ đồ lót Multiplex

(DiagXotics Inc USA). 1: 100 bp phân tử

trọng lượng đánh dấu, 2 & 4: nước cất vô trùng,

3: kiểm soát tôm SPF DNA âm tính

mẫu), 5: Litopenaeus setiferus mẫu, 6:

Farfantepenaeus aztecus mẫu, 7: F. duorarum

mẫu và 8: tích cực WSSV, IHHNV, NHP

HPV mẫu kiểm soát.

  NHP đã được sử mắc bệnh

Mỹ kể từ năm 1985, ảnh hưởng đến tôm nuôi như

L. vannamei và L. stylirostris (Vincent và Lotz, 2007).

Tuy nhiên, F. aztecus, L. setiferus, và F. californiensis

(Holmes) được báo cáo như là máy chủ (Lightner, 1996;

Vincent và Lotz, 2007), trong khi tôm sú và

Chinensis Fenneropenaeus được báo cáo như

thực nghiệm dễ bị nhiễm để NHP (Pantoja

và Lightner, 2003). NHP là một pleomorphic

nội bào α Proteobacterium, lây nhiễm

biểu mô tế bào trong ống hepatopancreatic. NHP

phát hiện dựa trên các kỹ thuật khác nhau, với PCR

là giao thức khẳng định (Lightner, 1996).

NHP đã được báo cáo ở các trang trại nuôi tôm từ

Bờ biển Thái Bình Dương của Mexico (Ibarra-Gámez et al., 2007)

và gần đây đã được phát hiện ở các trang trại tôm ở

Campeche, Mexico (Río-Rodríguez et al., 2006). Điều này

vi khuẩn cũng đã được đề xuất như là một có thể

tác nhân gây bệnh cho tôm hoang dã, tuy nhiên nó đã không được

trước đây đã được phát hiện trong penaeids hoang dã (Río-Rodríguez

et al, 2006). Để hiểu biết của chúng tôi, công việc này là

Báo cáo đầu tiên về sự hiện diện của hoại tử

hepatopancreatitis (NHP) trên tôm hoang dã, mà là một

tìm kiếm quan trọng cho nghiên cứu trong tương lai và cho thấy một cao

mức độ phù hợp cho ngành công nghiệp thủy sản và nuôi trồng thuỷ sản

Golf của Mexico.

  Các phát hiện của NHP, và những người khác tác nhân gây bệnh,

mở ra một cơ hội để gia tăng nghiên cứu trên

đầm phá ven biển về điều này và các bệnh khác trên hoang dã

quần thể tôm, biogeographical của họ

sự hiện diện, phân phối và / hoặc thành lập trên

tôm và các loài giáp xác khác, ảnh hưởng của

nghề đánh bắt tôm, nuôi trồng thuỷ sản, vv Ngoài ra, mở một

cơ hội để nghiên cứu cơ chế lây lan và

nguồn tác nhân gây bệnh (nuôi trồng thủy sản, sản phẩm, vv).

Lời cảm ơn

  Nghiên cứu này được tài trợ bởi Fomix

Tamaulipas-CONACyT (TAMPS-2005-C08-08) và

Programa de Mejoramiento del Profesorado (Sep-

PROMEP). Hỗ trợ từ Quốc Thủy sản

Chương trình Thú y (PRONALSA-CONAPESCA)

và tổ chức của chúng tôi (FMVZ, UAT) cũng được

đánh giá cao.

Tài liệu tham khảo

Aguirre-Guzmán, G.-Martínez Sánchez, JG, Campa

Cordova, A.I., Luna-González, A. và Ascencio,

F. 2009. Penaeid tôm hệ thống miễn dịch:

minireview. Thái J. thú. Med. 39: 205-215.

Bartley, D.M., Bondad-Reantaso, M.G. và

Subasinghe, R.P. 2006. Một phân tích rủi ro

khuôn khổ cho sức khỏe động vật thủy sản

quản lý trong tăng cường cổ phần hàng hải

chương trình. Cá. Res. 80: 28-36

Briggs, M., Funge-Smith, S., Subasinghe, R. và

Phillips, M. 2004. Giới thiệu và chuyển động

tôm thẻ chân trắng Penaeus stylirostris Penaeus trong

Châu Á và Thái Bình Dương. Dòng tiêu đề: RAP

Xuất bản - 2004/10 88 p.

Britton, J.C. và Morton, B. 1989. Shore sinh thái của

Vịnh Mexico. Đại học Texas Press,

Austin, Mỹ.

Cock, J., Gitterle, T., Salazar, M. và Rye, M. 2009.

Chăn nuôi cho khả năng kháng bệnh của Penaeid

tôm. Nuôi trồng thủy sản. 286: 1-11.

Fernandez-Martinez, R., Rangel-Davalos, C., Ramirez-

Flores, M. Gonzalez-Cruz, A. và Conde-Aguirre-Guzman G. et al. / Thái J. thú. Med. Năm 2010. 40 (3): 337-341. 341

Galaviz, E. 2004. Tồn tại và phát triển của nâu

aztecus Farfantepenaeus tôm trong nuôi lồng

Laguna Madre, Tamaulipas, Mexico. IX

Nuôi trồng thủy sản Latin American Quốc hội,

Villahermosa Tabasco, Mexico, p. 159 (Tây Ban Nha

phiên bản)

Flegel, T.W. Năm 2006. Sự nguy hiểm đặc biệt của virus

tác nhân gây bệnh tôm translocated cho

nuôi trồng thủy sản. Khoa học viễn tưởng. Châu Á. 32: 215-221.

Freitas, P.D., Calgaro, M.R. và Galetti, Jr.P.M. Năm 2007.

Sự đa dạng di truyền trong và giữa các

broodstocks của tôm thẻ chân trắng Litopenaeus

tôm thẻ chân trắng (Boone, 1931) (Decapoda, Penaeidae)

và ý nghĩa của nó đối với các gen

bảo tồn. Braz. J. Biol. 67: 939-943.

Gill, T.A. Năm 2000. Chất thải từ chế biến thủy sản

động vật và sản phẩm động vật: ý nghĩa trên

chuyển động vật thủy sản tác nhân gây bệnh. FAO Thủy sản

Thông tư này. Số 956. Rome, Italy.

Guzmán-Sáenz, F.M., Molina-Garza, Z.J., Pérez-

Castaneda, R., Ibarra-Gámez J.C. và Galavíz-

Silva, L. 2009. Truyền nhiễm hypodermal và

tạo máu hoại tử virus (IHHNV) và

Loại virus hội chứng Taura (TSV) ở tôm tự nhiên

(Farfantepenaeus aztecus Ives, 1891 và

Litopenaeus setiferus Linnaeus, 1767) của La

Laguna Madre, Vịnh Mexico. Rev. Biol. Tháng Ba

Oceanogr. 44: 663-672

Ibarra-Gámez, JC, Galavíz-Silva, L. và Molina-

Garza, Z.J. Năm 2007. Phân phối của hoại tử

hepatopancreatitis vi khuẩn (NHPB)

nuôi tôm thẻ chân trắng, tôm chân trắng Litopenaeus,

từ Mexico. Cienc. Tháng Ba 33: 1-9.

Lightner, D.V. Năm 1996. Bệnh của văn hóa penaeid

tôm. : Sổ tay nuôi trồng hải sản,

Giáp xác Nuôi trồng thủy sản. CRC Press. P. McVey

(Ed.) Boca Raton Mỹ 393-486.

Pantoja, C.R. andLightner, D.V. Năm 2003. Hoại tử

hepatopancreatitis: chẩn đoán, phân phối trong

tôm. Toàn cầu nuôi trồng thủy sản Advocate. 06:18.

Río-Rodríguez, RE, Soto-Rodríguez, S., Lara-Flores,

M., Cu-Escamilla, sau Công Nguyên và Gomez-Solano, M.I.

Năm 2006. Hepatopancreatitis hoại tử (NHP)

bùng phát trong một trang trại tôm ở Campeche,

Mexico: một báo cáo trường hợp đầu tiên. Nuôi trồng thủy sản. 255:

606-609.

Vincent, A.G. và Lotz, J.M. 2007. Ảnh hưởng của độ mặn trên

truyền của hepatopancreatitis hoại tử

vi khuẩn (NHPB) Kona chứng khoán Litopenaeus

tôm thẻ chân trắng. Dis. Aquat. Org. 75: 265-268.

Wang, Q., Zhuang, Z., Denga, J. và Ye, Y. năm 2006.

Cổ phần nâng cao và di chuyển của

tôm Penaeus chinensis ở Trung Quốc. Cá. Res. 80:

67-76.